HRP標識二次抗体の希釈倍率は抗体の表記より検出試薬を優先しないと、データが丸ごと無駄になります。
ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)とは、西洋わさびの根から得られる酵素で、正式名称をホースラディッシュペルオキシダーゼといいます。この酵素は代謝回転速度が非常に速く、基質と反応して短時間で強いシグナルを生み出す特性を持っています。つまり、少量の標的タンパク質でも確実に可視化できる、感度の高い検出系を実現できるということです。
HRPを標識した二次抗体は、一次抗体のIgGに特異的に結合します。一次抗体が組織や細胞内の目的タンパク質(抗原)を捕まえ、その後にHRP標識二次抗体が一次抗体に結合することで、シグナルを増幅する仕組みです。一次抗体1分子に対して複数の二次抗体が結合できるため、シグナル増幅効果が得られるのが大きな利点です。
歯科研究においては、歯周組織・歯髄・口腔粘膜・顎骨などの組織切片を対象とした免疫組織化学染色(IHC)や、タンパク質発現を調べるウェスタンブロット(WB)、さらにサイトカインや成長因子の定量に使うELISAなど、多岐にわたる実験でHRP標識二次抗体が活躍しています。
実際に、歯周病の分子病態研究では歯周組織切片にHRP標識ヤギ抗ウサギIgG抗体(1:5000希釈)が使用され、根尖性歯周疾患の研究では「HRP標識抗ウサギ二次抗体によるVEGF発現の免疫組織染色」が報告されています。これが基本です。
HRPの基質には、発色性(DAB、TMB、OPD)・蛍光性(
Now I have sufficient research. Let me compile and write the article.